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MiSeq上机测序时如何准备<2nM 的文库

MiSeq 文库变性和稀释指南中介绍了关于稀释2 nM和4 nM文库标准均一化方法。该稀释步骤可以确保最后使用HT1稀释后NaOH的浓度不高于1 mM。NaOH浓度过高可抑制文库与流动槽(Flow Cell)的杂交,导致簇密度降低。
在文库浓度低于2 nM且高于0.5 nM的情况下也可以进行MiSeq的测序。可通过以下的标准均一化流程NextSeq 500和550测序系统的文库变性和稀释指南将文库稀释到20 pM。这个方案中,可添加200 mM Tris-HCl来中和过量的NaOH,以确保NaOH在最终的溶液中被完全中和。
为了稀释 < 2 nM文库,可按照以下Nextseq 500和Nextseq 550测序系统变性和稀释文库指南中介绍的1 nM或0.5 nM起始文库浓度的步骤,详见图1。当文库稀释到20 pM,按照MiSeq系统文库变性和稀释指南中介绍的稀释变性到20 pM文库后的步骤进行进一步稀释,详见图2。
有关具体仪器的详细说明,参考具体的文库变性和稀释指南。
图 1. NextSeq 500和550测序系统文库变性和稀释指南标准均一化方法的变性和稀释步骤
图 2. MiSeq系统变性和稀释文库指南标准均一化方法中对变性后的20 pM文库进一步稀释的步骤
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